James Marsters nasceu na cidade de Greenville, Califórnia e foi criado em Modesto, Califórnia. Marsters sempre soube que queria ser um ator. Começou a atuar em uma peça na quarta série: "Winnie the Pooh". Estudou teatro na famosa escola de Nova Iorque: Juilliard. Começou sua carreira profissional no teatro, atuando em produções incluindo: "The Tempest" e "Red Noses" no teatro Goodman, em Chicago.
Marsters começou a atuar na TV na série "Northern Exposure", como um padre. Ele se mudou para Los Angeles e em meses conseguiu o papel de Spike, em "Buffy".
Marsters foi recentemente visto no filme "The House on Haunted Hill", um terror psicológico Geoffrey Rush, Famke Janssen, Taye Diggs e Lisa Loeb.
Quando não está trabalhando, Masters gosta de tocar violão, assistir futebol e passar tempo com seus amigos na praia. Ele atualmente vive em Los Angeles, Califórnia.