Author: Oswaldo Herrera Valdés
Company: Familia

Valorando la calidad de la tinción de Wright-Giemsa

Figura 1 Artefactos comunes.

Las extensiones de sangre y medula deben ser juzgadas en cuanto a calidad del frotis y la calidad de la tinción. Al valorar un frotis teñido debe establecerse primeramente su aspecto general y la calidad de la tinción; después, a bajo aumento, se buscan zonas de la extensión que parezcan representativas, que muestren todo el espectro polícromo, que estén libres de artefactos y que tengan las células bien extendidas. Las figuras 1-1 a 1-4 muestran errores comunes de tinción. 

La simple observación de un frotis de sangre debidamente teñido muestra que es de un color rosado. Los hematíes deberían ser de color naranja rojizo pálido con un matiz mas cercano al rosado que al rojo o anaranjado.  Los llamados hematíes subteñidos (fig. 1-1, X 800) son de hecho de color naranja brillante o rojo. Que el frotis está realmente subteñido lo confirma el color intenso de los hematíes, entre los que aparecen leucocitos pálidos, de color azul celeste.  El núcelo del granulocito neutrófilo tendría que ser de un color púrpura pura netamente definido, y distinguible con toda claridad del color rosado aberenjenado del citoplasma. En vez de esto, el núcleo del neutrófilo es indistinto y azul y el citoplasma rosado y poco definido.  El frotis parece como lavado.  Esta subtinción puede ser debida a diversos factores.  Uno corriente es una acidez excesiva, a menudo por agua tibia ácida, pero pueden intervenir otras sustancias: El pH del tampón puede naber descendido por debajo de 6.4; el pH del colorante puede ser incorrecto o pueden haber vapores ácodos en la zona de trabajo.  A menudo, la subtinción es debida a un acortamiento de la fase más vulnerable e imprevisible de la tinción policroma: exposición del frotis al Wright-Giemnsa después de añadir agua (o exposición al Giemsa diluido en agua depués de la tinción de Wright).  Aunque no existen eosinófilos en la figura 1.1, los gránulos eosinófilos son indicadores excelentes del pH, ya que se tiñen de rojo brillante cuando los reactivos son ácidos y de azul o gris oscuro cuando son alcalinos. 

El hallazgo incongruente de que, tras la tinción, los hematíes se han convertido en células de color verde (fig. x 800) significa generalmente que el frotis es demasiado grueso.  Sin embargo, las células de la figura 1.2 están muy bien distribuidas.  Otra posibilidad, es que este frotis superteñido haya sido lavadoo inadecuadamente, aunque es improbable ya que el fondo es claro.  Lo más seguro es que la duración de la tinción fuese excesiva o que los reactivos de la tinción  o el tampón fuesen demasiado alcalinos (es decir, que el pH fuese superior a 6.7).  Contrariamente a la subtinción, que hace imposible la interpretación del frotis y que requiere una nueva tinción una vez ha sido eliminado el factor responsable, la tinción excesiva no impide necesariamente la valoración de las células.  El neutrófilo, situado cerca del límite superior la figura y el linfocito próximo al límite inferior muestran ambos un citoplasma más oscuro que el observado en un frotis bien teñido.  Sin embargo, a pesar del artefacto debido a la alcalinidad, su identificación así como sus rasgos morfológicos individuales han permanecido claramente definidos.
 
Un ejemplo de un frotis de sangre alterado por intensos depósitos de un colorante autooxidado (se muestra en la figura 1.3 = x:000) que revela grandes precipitados, granulosos, esféricos u oblongos, de colorante metacromático, tanto  en las células como entre ellas.  Este problema puede ser generalmente obviado filtrando el reactivo de tinción antes de su empleo, aun cuando es todavía más prudente usar un reactivo fresco que este libre de precipitados.  Cuanda los reactivos de tinción dejan finos depósitos dispersos en el frotis sanguíneo, éstos pueden ser muy fácilmente confundidos con cuerpos de inclusión, o los eritrocitos pueden dar la impresión de estar parasitados o infectados.  Que tales errores de interpretación son muy posibles,  queda aquí ilustrado por tendencia de los precipitados a adherirse a la superficie de las células, creando a menudo la falsa imagen de que muchas particulas son intracelulares o que sobresalen de las membranas celulares.  En ocasiones, el colorante precipitado en los hematíes puede estimular exactamente el aspecto de 1 glóbulos rojos teñidos con un colorante supravital y conteniendo cuerpos de Heinz.  Un error común que llevará depósito de colorante precipitado, aun cuando el reactivo este plenamente solubilizado en el momento de su adición, es el empleo inicial de un volumen inadecuado de colorante no diluido.  Si añaden algo menos de las 15 gotas aproximadamente, del colorante a un cubre-objetos estándar (22 mm al cuadrado), o si el cubreobjetos no está completamente cubierto de liquido, una porción del colorante puede secarse inevitablemente sobre el cristal.  Tanto si se usan cubreobjetos como portaobjetos deberían tomarse todas las precauciones posibles para evitar una evaporación apreciable de los disolventes del colorante.  Después de la segunda fase de método de tinción, es importante el eliminar el colorante diluido del cubreobjetos (o portaobjetos) sumergiéndolo en agua pero no por decantación.
 
La presencia de agua en la solución metanólica de la tinción de Wright o la condensación de humedad en las superficies de los frotis de sangre antes de su fijación producen artefactos característicos (fig. 1-4, x 2.000).  Cuando en todo el frotis aparezcan burbujas de agua en los hematíes, no se hará ningún intento de interpretación de la morfología toda vez que el agua produce varios artefactos capaces de burlar al observador más experimentado.  Si no fuese por la presencia de burbujas de agua, los hematíes serían erroneamente interpretados como unos elementos pequeños, hipocrómicos y festoneados: se trata de artefactos de retracción y simulan cambios que ocurren en frotis de sangre excesivamente gruesos. La humedad es la causa de que los hematíes parezcan «buñuelos» picnóticos.  Es particularmente engañoso el aspecto de los linfocitos que han sido expuestos a pequeñas concentraciones de humedad. Como puede observarse en el linfocito de la figura 1-4, la célula está arrugada y su citoplasma que posiblemente era escaso queda simplemente reducido a pequeñas regiones prominentes. El neutrófilo en banda de aspecto normal atestigua que la humedad ejerce escaso o ningún efecto sobre este tipo celular.  Sin embargo, la humedad o el vapor de agua pueden decolorar los gránulos de los eosinófilos o basófilos no fijados.